Como calcular o comprimento de fragmentos de DNA

Escrito por shawn radcliffe | Traduzido por pamela oliveira
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Como calcular o comprimento de fragmentos de DNA
Cientistas usam eletroforese em gel para determinar o comprimento de fragmentos de DNA (Comstock/Comstock/Getty Images)

Cientistas usam uma técnica chamada de eletroforese em gel para determinar o comprimento de fragmentos de DNA. Nesse processo, amostras desconhecidas de DNA e um padrão são colocados em poços -- pequenos buracos -- na borda do gel. O padrão contém fragmentos de tamanho conhecido, medidos em pares de base. Uma corrente elétrica faz com que os fragmentos migrem pelo gel, com as moléculas menores indo mais longe. A distância percorrida e o tamanho dos fragmentos do padrão são plotados em um papel de gráfico semilogarítmico. O tamanho dos fragmentos desconhecidos pode ser, então, calculado comparando-se a distância percorrida com o gráfico.

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O que você precisa?

  • Foto do gel de eletroforese
  • Papel de gráfico semilogarítmico

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Instruções

  1. 1

    Obtenha uma fotografia do gel depois da eletroforese. Os fragmentos de DNA estarão visíveis como bandas em colunas -- conhecidas como pistas.

  2. 2

    Identifique a coluna que contém o padrão. Essa molécula de DNA foi cortada com uma enzima em fragmentos de tamanho conhecido -- ou peso molecular. Deve haver uma banda correspondente a cada fragmento.

  3. 3

    Nomeie cada fragmento do padrão de DNA com o seu tamanho, medido em pares de base. Essa informação é dada nos materiais para a eletroforese ou na literatura científica.

  4. 4

    Meça a distância -- em milímetros -- percorrida pelos fragmentos do padrão de DNA. Meça da frente do poço -- onde a amostra foi colocada no gel -- até a frente da banda formada no gel.

  5. 5

    Coloque os dados na tabela.

    Curva de calibração

  1. 1

    Consiga um pedaço de papel de gráfico semilogarítmico no qual vai desenhar a curva de calibração do padrão de DNA. O papel semilogarítmico possui uma escala linear em um eixo e uma logarítmica no outro. Isso permite que você plote o logaritmo da distância percorrida sem ter que calculá-lo.

  2. 2

    Nomeie o eixo x como distância -- em milímetros -- percorrida pelos fragmentos de DNA. A escala do eixo x deve ser linear.

  3. 3

    Nomeie o eixo y como o tamanho -- em pares de base -- dos fragmentos. A escala do eixo y deve ser logarítmica.

  4. 4

    Plote a distância percorrida e o tamanho dos fragmentos do padrão de DNA no gráfico.

  5. 5

    Conecte os pontos com a melhor reta para criar a curva de calibração. Ela é chamada de curva, mas precisa ser reta.

    Fragmentos de DNA desconhecidos

  1. 1

    Meça a distância -- em milímetros -- percorrida pelos fragmentos de DNA desconhecidos.

  2. 2

    Localize no eixo x do gráfico a distância percorrida pelos fragmentos desconhecidos.

  3. 3

    Desenhe uma linha vertical desse ponto no eixo x até a curva de calibração.

  4. 4

    Desenhe uma linha horizontal do ponto de interseção com a curva até o eixo y. Esse é o tamanho -- em pares de base -- do fragmento desconhecido.

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