Como calcular o tempo morto em uma coluna cromatografia líquida

Escrito por sean lancaster | Traduzido por pina bastos
Como calcular o tempo morto em uma coluna cromatografia líquida
Aprenda a caracterizar um sistema de cromatografia líquida (ou LC, em inglês) (Ryan McVay/Photodisc/Getty Images)

A cromatografia é amplamente usada nos laboratórios químicos para determinar a identidade de um componente desconhecido. Esse componente flui através do material do invólucro da coluna e interage com as partículas. As interações entre as partículas e os componentes na amostra são baseadas na atração ou solubilidade entre elas. As moléculas que não têm interação com as partículas do material de invólucro têm permissão para passar através dele sem impedimento. O tempo necessário para as moléculas passarem a partir do ponto de injeção para o sistema no pico máximo de uma molécula não reativa é o tempo morto da coluna.

Instruções

  1. 1

    Reforce a amostra desconhecida com uma pequena quantidade de um composto que não é retido pelo material da coluna. O composto passará através da coluna sem interagir com o material do invólucro na coluna.

  2. 2

    Carregue a seringa com aproximadamente 20 microlitros da amostra e insira a agulha da seringa no porto da injeção. Carregue o laço da amostra da válvula esvaziando a seringa na válvula.

  3. 3

    Ligue o instrumento de cromatografia e comece a fase móvel. Essa fase flui através do instrumento e leva a amostra através da coluna e o detector que termina em um receptáculo de dejetos.

  4. 4

    Ative a válvula, o que permite que a amostra entre no caminho da fluidez do solvente. Este carrega os componentes da amostra para o topo da coluna e a separação começa.

  5. 5

    Monitore o sinal de emissor do detector e identifique o primeiro pico no cromatógrafo. A diferença entre o tempo da injeção e o máximo do primeiro pico, representada pelo componente do reforço, é o tempo morto.

  6. 6

    Meça a distância entre o ponto de injeção e a altura máxima do primeiro pico. Multiplique a distância pela velocidade do papel ou do eixo para descobrir o tempo morto.

O que você precisa?

  • Molécula não reativa
  • Instrumento de cromatografia líquida
  • Seringa de amostra

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