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Como definir uma contagem de células viável

Atualizado em 23 março, 2017

Quando se realiza uma pesquisa envolvendo células animais, é muito importante monitorar a saúde da população delas, afinal de contas, é o propósito da maioria das pesquisas celulares determinar os efeitos de certos tratamentos ou organismos microbiais em células vivas. É possível determinar a porcentagem geral de células viáveis em uma cultura usando uma técnica chamada de contagem por exclusão de tripan azul. O tripan azul é um corante absorvido somente por células mortas, portanto, quando ele é adicionado a uma amostra de células, somente as mortas ficam azuladas. A partir daí, é somente uma questão de contar as células e calcular suas porcentagens.

Instruções

A técnica de contagem por exclusão permite que se destaquem as células mortas, facilitando a contagem (Hemera Technologies/AbleStock.com/Getty Images)

    Prepare as células para vizualização

  1. Use a micropipeta para misturar 100 microlitros da suspensão de células com 100 microlitros do corante.

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  2. Adicione 25 microlitros da mistura resultante a cada uma das rodas do hemocitômetro.

  3. Coloque a lamela por cima das rodas do hemocitômetro.

    Realize a contagem

  1. Coloque o hemocitômetro no microscópio ótico e visualize com aumento de 100 vezes.

  2. Conte o número de células vivas e transparentes em um espaço de um milímetro quadrado, demarcado no hemocitômetro. Conte o número total de células no mesmo espaço. Divida o número de células vivas pelo número total de células e multiplique por 100 para determinar a porcentagem de células viáveis.

  3. Repita o passo acima para vários outros espaços de um milímetro quadrado. Calcule a porcentagem média de células viáveis somando os cálculos resultantes e dividindo pelo número total de cálculos. Esse número deve ser uma boa estimativa da porcentagem total de células na população que são viáveis.

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O que você precisa

  • População de células
  • Microscópio ótico
  • Tripan azul
  • Micropipeta
  • Hemocitômetro
  • Lamela

Referências

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