Como identificar Enterobacter Aerogenes API 20E

Escrito por david stewart | Traduzido por amanda nunes
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Como identificar Enterobacter Aerogenes API 20E
Enterobacter aerogenes são fáceis de identificar com o kit de teste API-20E (Chad Baker/Photodisc/Getty Images)

Enterobacter aerogenes e outras espécies de Enterobacteriaceae são fáceis de serem identificados usando kit de testes API-20E. Esse kit, produzido pela bioMeriuex Inc., inclui 20 mini-tubos para o teste. O teste consiste na inoculação de uma suspensão pura de bactérias nos tubos e na leitura das cores das reações que ocorrem. A identificação depende da conversão dessas reações colorimétricas em um código de sete dígitos conhecido como Índice de Perfil Analítico. A combinação desse código com o banco de dados do fabricante fornece uma identificação do organismo.

Nível de dificuldade:
Desafiante

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O que você precisa?

  • Cultura pura de Enterobacter aerogenes
  • Ampola contendo 5 ml de cloreto de sódio a 0.85%
  • Pipeta
  • Caixa incubadora
  • Água destilada ou desmineralizada
  • Óleo mineral
  • Incubador
  • Telefone multi-frequencial

Lista completaMinimizar

Instruções

    Seção 1

  1. 1

    Isole o micro-organismo que você deseja identificar em um meio de cultura para Enterobacteriaceae. Use o kit de testes API 20E somente em culturas puras e não com espécies de culturas mistas.

  2. 2

    Abra a ampola contendo 5 ml de cloreto de sódio com uma porcentagem média de 0.85. Remova uma única colônia de uma lâmina de isolamento de 18 a 24 horas com uma pipeta, e adicione-a na ampola. Misture para obter uma suspensão homogênea. Use essa suspensão assim que você a preparar.

  3. 3

    Monte a caixa incubadora que consiste de tubos semelhantes a um favo de mel em uma bandeja com tampa. Abra a caixa e adicione 5 ml de água destilada ou desmineralizada nas bandejas dos tubos. Abra a tira fornecida pelo kit de teste API 20E, e coloque na caixa incubadora.

  4. 4

    Preencha o tubo e a cúpula dos tubos marcados com "GEL", "VP", e "CIT" com a suspensão bacteriana que você preparou. Nos poços remanescentes, coloque a suspensão bacteriana no tubo mas não na cúpula. Adicione óleo mineral nos poços marcados com ''ADH'', ''ODC'', ''LDC'', ''URE'' e ''H2S'' para criar um ambiente anaeróbico.

  5. 5

    Cubra a caixa incubadora com a tampa, e incumbe-a em uma temperatura entre 34 e 38º graus Celsius de 18 até 24 horas.

  6. 6

    Observe os tubos e anote as reações na folha de resultados. Ao ter no mínimo três testes positivos, siga para as reações colorimétricas usando os testes com soluções químicas, ou reagentes, que vêm com o kit. Adicione uma gota do reagente TDA no tubo marcado com ''VP''. Se menos do que três testes forem positivos, incube as tiras por mais 24 horas antes de adicionar esses reagentes.

  7. 7

    Observe a cor mudar nos tubos. Uma cor marrom avermelhada no TDA indica uma reação positiva. Espere por 10 minutos após adicionar os reagentes do kit no VP1 e no VP2. Considere uma cor vermelha ou rosa como positiva e uma cor rosa pálido aparecendo depois de 10 minutos como negativa.

  8. 8

    Adicione uma gota única do reagente de JAMES do kit de teste ao poço marcado com ''IND''. Considere uma cor rosada na cúpula inteira como uma reação positiva.

  9. 9

    Realize o teste da oxidase como especificado pelo fabricante do kit, e grave seus resultados junto com os resultados dos 20 testes anteriores.

  10. 10

    Use a bandeja de leitura do kit de testes para colocar valores para a reação observada em cada um dos testes. Adicione esses valores como foi estabelecido ao obter o número de perfil com sete dígitos.

  11. 11

    Coloque esse número de perfil de sete dígitos no banco de dados do fabricante do kit através de um telefone multi-frequencial. Espere até receber a identificação fornecida pelo banco de dados. Se o número de perfil não fornecer resultados específicos, realize testes suplementares especificados pelo fabricante.

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