Como isolar a lisozima das claras de ovos

Escrito por michel charles | Traduzido por marla maisonnett
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A lisozima, também conhecida como muramidase, é um resíduo de aminoácido 129 (129 AA) da enzima e é relativamente pequeno. Ela está presente na clara de ovo de galinha e também na secreção da mucosa, como saliva e lágrimas. Em 1922, Alexander Fleming a descobriu, e desde então ela tem sido utilizada como objeto principal de análises de raios-x por muitos anos. Agora está sendo utilizada como um fármaco anti-cancerígeno e também no tratamento da infecção por HIV. A propriedade antibacteriana da clara deve-se à presença da lisozima.

Nível de dificuldade:
Moderado

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O que você precisa?

  • 1 litro de clara de ovo
  • 150 ml de solução de bentonita 10%
  • Cloreto de potássio 1%
  • tampão de 0,5 de fosfato molar
  • 300 ml de solução aquosa de piridina 5%
  • Ácido sulfúrico
  • Argila
  • Centrífuga Sharples
  • Saco de celofane
  • Álcool 75% ou acetona (opcional)

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Instruções

  1. 1

    Pegue as claras e misture com a bentonita e o cloreto de potássio. Misture bem por 3 a 5 minutos sem criar bolhas.

  2. 2

    Separe a argila da suspensão em uma centrífuga Sharples. Lave-a com o fosfato molar a um pH de 7,5.

  3. 3

    Lave a argila com a piridina três vezes para remover as proteínas adsorvidas inativas. Pegue a mesma quantidade de piridina e adicione ácido sulfúrico para alterar o valor do pH para 5,0. Lave mais duas vezes a argila separadamente com a solução de piridina com o pH alterado. Isso resultará na elução de lisozima. Centrifugue a argila em uma centrífuga tipo lote para remover os eluatos.

  4. 4

    Coloque os eluatos ativos em um saco de celofane e dialise contra água corrente. Certifique-se de que nenhum cheiro de piridina permaneça. Seque o soluto até obter o pó de lisozima. Outra alternativa é adicionar 75% de álcool ou acetona aos eluatos e fazer uma diálise para obter o lisozima.

Dicas & Advertências

  • Finalize o processo completo em 24 horas para obter os melhores resultados.

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