Como reconstituir o hormônio IGF

Escrito por dr. bob goat | Traduzido por fabiana silva
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Como reconstituir o hormônio IGF
O IGF-1 desidratado pode ser reconstituído (laboratory image by Alina Isakovich from Fotolia.com)

O fator de crescimento semelhante à insulina-1 (IGF, IGF-1) é um hormônio biologicamente ativo similar à insulina. O IGF-1 influencia na atividade anabólica de uma vasta gama de tipos de células, incluindo músculos, ossos e tecidos cartilaginosos. Ele é usado clinicamente para o tratamento de crianças com baixa estatura, que nasceram pequenas para a idade gestacional. A preparação de uma solução de trabalho a partir de IGF desidratado é fornecida apenas para fins de pesquisa.

Nível de dificuldade:
Moderado

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O que você precisa?

  • Frasco de IGF-1 desidratado (100 mcg ou 1 mg)
  • 5 ml de vinagre branco destilado ou ácido acético glacial diluído (ácido acético a 5%)
  • Água estéril (10 ml)
  • Seringas de 1, 3, e 10 cc
  • Frascos esterilizados de 10 ml (2)
  • Filtro de seringa (0,2 mícron) com disco de 13 mm ou menor
  • Algodão embebido em álcool

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Instruções

  1. 1

    Veja a sessão Recursos abaixo, para acessar o link que o direcionará para os sites das empresas fornecedoras de IGF-1 para pesquisa. Obtenha 100 microgramas (mcg) ou 1 miligrama (mg) de IGF-1 desidratado fornecido por uma fonte confiável.

  2. 2

    Prepare uma solução de trabalho de ácido acético de 100 mM (ácido acético a 0,575%). Esta solução também pode ser comprada diluída (veja a sessão Recursos).

    Comece a partir de uma solução a 5% (vinagre branco destilado ou de ácido acético glacial diluído): Dilua o ácido acético a 5%, adicionando de 4,6 cc a 6,4 cc de água estéril, para produzir uma solução a 2,3%. Dilua a solução a 2,3% (1:4) adicionando de 1 cc a 3 cc de água estéril, para produzir uma solução a 0,575%.

  3. 3

    Filtre a solução esterilizada de ácido acético (opcional).

    O volume de 4 cc de 100 mM (ácido acético a 0,575%) pode ser esterilizado por filtragem, para minimizar o risco de contaminação bacteriana. Um filtro de seringa com disco de 13 mm ou menor (filtro de 0,2 micron) é conectado à seringa cheia, e a solução que for expelida estará esterilizada pelo filtro.

    Observe que o filtro de seringa possui um volume nulo. Ou seja, se um volume de 1 ml for carregado na seringa e passado por um filtro, menos de 1 ml deste volume saíra pelo filtro. Esta perda pode ser considerada, carregando uma quantidade de solução suficiente para encher o volume nulo, observe o volume perdido, e em seguida dispense o volume desejado. De modo alternativo, a solução pode ser seguida por um volume (de 1 a 2 cc) de ar para limpar o filtro.

  4. 4

    Adicione 1 cc de ácido acético a 100 mM ao IGF-1 desidratado.

    Limpe/esterilize a parte de cima do frasco de IGF-1 com algodão embebido em álcool. Introduza a agulha no frasco de IGF-1, e adicione 1 cc de ácido acético de 100 mM (ácido acético a 0,575%) ao IGF-1 seco. Agite suavemente o frasco para reconstituir o pó. A solução de trabalho produzida é de 100 mcg/ml ou de 1000 mcg/ml, dependendo da quantidade de IGF-1 (100 mcg ou 1 mg) no frasco.

  5. 5

    Armazene o IGF-1 reconstituído.

    O IGF-1 fica estável à temperatura ambiente (seis meses). Ele pode ser armazenado a 4 °C (refrigerador), caso seja necessário guardar por um prazo mais longo (dois anos). Evite submetê-lo a vários ciclos de congelamento e descongelamento, e expô-lo às mudanças freqüentes de temperatura.

Dicas & Advertências

  • Para volumes, 1 mililitro (ml) é igual a um centímetro cúbico (cc).
  • A molaridade de uma solução de ácido acético a 100% é igual a 17,4 Molar.
  • O IGF-1 pode ser reconstituído em água estéril para uso imediato.
  • Use "água estéril para injecção", se a solução for testada in vivo.
  • O IGF-1 seco deve ser armazenado a uma temperatura de -20 a 4 °C, e ele fica estável por, no mínimo, dois anos, ou seis meses à temperatura ambiente.
  • Tenha cuidado quando trabalhar com ácidos concentrados ou diluídos. Eles podem causar queimaduras químicas, se entrarem em contato com a pele, com os olhos ou com as membranas mucosas.
  • Observe que o Tercica´s Increlex é o único fornecedor de IGF-1, para aplicações clínicas nos EUA. Todos os outros IGF-1 são aprovados para fins de pesquisa somente.

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