Como fazer BDA (ágar batata dextrose)
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Ágar batata dextrose (BDA) é um bom meio de propósito geral semissólido usado para criar fungos. Também é frequentemente utilizado para isolar, crescer e manter espécies de cogumelo em formação. Pratos prontos de petri ou tubos contendo BDA podem ser comprados, ou o BDA pode ser rapidamente feito usando uma pré-mistura comercial. No entanto, não é difícil fazer uma versão simples e eficaz com um baixo custo.
Preparando extrato de batata
Step 1
Coloque as batatas em uma panela com cerca de 1,2 litros de água da torneira e deixe ferver em um fogão por uma hora.
Step 2
Tire a panela do fogo e deixe esfriar o líquido até que ele possa ser manuseado confortavelmente (cerca de dez minutos).
Step 3
Despeje o extrato de batata líquido através de um filtro ou gaze e recolha-o para outro recipiente.
Preparando a mistura
Step 1
Adicione dextrose e ágar a um litro de água do extrato de batata.
Step 2
Teste o pH da solução com papel testador de pH ou medidor de pH.
Step 3
Se o pH estiver acima de 6,5, diminua-o, adicionando uma gota da solução de ácido clorídrico de cada vez e fazendo um novo teste.
Step 4
Se o pH for inferior a 6, ajuste-o adicionando uma gota de solução de hidróxido de sódio de cada vez e fazendo um novo teste.
Esterilização
Step 1
Misture bem e divida-o em lotes menores de 250 mililitros. Despeje em quatro frascos de 500 ml (cada frasco deve estar cheio até a metade para não ferver).
Step 2
Cobra cada frasco com um pedaço de papel de alumínio dobrado livremente, de modo que a película não caia, mas também não faça uma vedação completa.
Step 3
Coloque os frascos em uma panela de pressão.
Step 4
Opere a panela de pressão de acordo com as instruções do fabricante para esterilizar o BDA a 121º C a uma pressão de 103,421 Pa (15 psi) durante 15 minutos.
Step 5
Desligue a panela de pressão e deixe-a voltar à pressão atmosférica, em seguida, retire os frascos e deixe esfriar até que eles possam ser manipulados.
Vertendo a mistura
Step 1
Alinhe os pratos de petri sobre uma superfície plana.
Step 2
Uma vez que os frascos foram arrefecidos à temperatura de manuseamento, mas antes que o meio comece a solidificar, segure o frasco com uma das mãos e retire a tampa de folha com a outra mão.
Step 3
Para cada prato de petri, tire a tampa com uma das mãos, rapidamente encha até a metade com BDA líquido e recoloque a tampa.
Step 4
Repita o passo 3 acima até que todos os pratos de Petri estejam preenchidos.
Step 5
Se houver qualquer sobra de BDA, recupere o frasco com a tampa da folha original, deixe esfriar e solidificar, aperte a tampa de alumínio e guarde em uma geladeira.
Referências
Recursos
Dica
- A maioria dos fungos cresce bem em condições ligeiramente ácidas, de modo que o valor final de pH deve estar compreendido entre 6 e 6,5, embora possa ser ajustado para qualquer pH necessário para uma espécie específica.
- Deixe as tampas do prato de petri aberta apenas o suficiente para permitir que a mistura a ser vertida para dentro e seja coberta o mais rápido possível.
- É preciso prática para ganhar velocidade e eficiência no derramamento de ágar em pratos de petri.
- Após arrefecimento e solidificação, os pratos de BDA podem ser embrulhados em plástico e armazenados no frigorífico durante meses.
- A maioria das águas da torneira contém minerais benéficos para o crescimento de fungos, no entanto, se a água local tiver as concentrações de minerais extremas ou um pH muito elevado ou baixo, substitua por água destilada.
Advertência
- Siga todas as instruções de operação e segurança do modelo de panela de pressão a ser utilizado.
- Deixe as tampas do frasco soltas quando for esterilizar na panela de pressão para evitar a super pressurização.
- Use luvas resistentes ao calor quando manusear recipientes quentes.
- Use óculos de segurança quando operar a panela de pressão, quando for remover o BDA esterilizado e durante o vazamento.
Sobre o Autor
Philip McIntosh has more than 30 years of experience as an equipment engineer, scientific investigator and educator. He has been writing for 16 years, and his work has appeared in scientific journals, popular science magazines, trade journals and on science and technology websites. McIntosh holds a B.S. in botany and chemistry, and an M.A. in biological science.
Créditos Fotográficos
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